「凍結保存しても大丈夫でしょうか」 大丈夫です。みんなそうしています。 「ライゲーション反応によりつないだインサートは緩く結合しているイメージ（傷口が完全にふさがっていない「かさぶた」のような）があるのですが」 イメージにしか過ぎません（そりゃともかく、一部を泳動して、ligation の確認はしておいた方がいいです）。 「凍結溶解した際に簡単に切れてしまうのではないかとかなり心配しております。」 無用な心配です。ほとんど切れません。 「インサートをつないだ環状ベクターはつぎにヒートショック操作により大腸菌に導入する予定でおります。」 ヒートショックでも、electoroporation でも、宿主側に問題がなければ入ります。 一応、私のプロフの自己紹介分を読んでいただけるとありがたいです。