DNA测序(A,T,C,G),DNA一级结构。

核苷酸序列测定的两种方法

第一代DNA测序：

１、Sｎａｇｅｒ双脱终止法（双脱氧链末端合成终止法）

２、Ｇｉｂｅｒｔ化学降解法

３、荧光自动化测序

测序的机理？？

DNA测序：（最初的测序仪一次只能测4个样，且分四个用到进行）

在DNA合成的基础上，采用高分辨率的聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）【 聚丙烯酰胺凝胶电泳（ polyacrylamide gel electrophoresis，简称PAGE），是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种常用电泳技术，用于分离 蛋白质 和 寡核苷酸 。 作用原理：聚丙烯酰胺凝胶为网状结构，具有分子筛效应。它有两种形式： 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 （Native-PAGE）和 变性聚丙烯酰胺凝胶 电泳。】获得的结果。聚丙烯酰胺凝胶电泳：可以分辨仅一个碱基差别的单链寡核苷酸。

测序时的DNA合成与普通的DNA合成的异同点

同：都需要引物、模板、酶以及底物

异：DNA测序的底物除了ｄＮＴＰ【 dNTP，deoxy-ribonucleoside triphosphate（ 脱氧核糖核苷 三磷酸）的缩写。是包括dATP, dGTP, dTTP, dCTP,等在内的统称，N是指 含氮碱基 ，代表变量指代A、T、G、C等中的一种。在生物 DNA 合成中，以及各种PCR（ RT-PCR （reverse transcription PCR）、Real-time PCR）中起原料作用。】外，还含有一定量的双脱氧核苷酸ｄｄＮＴＰｓ

全自动测序

DNA测序流程

单链DNA模板-DNA合成（掺入4种荧光标记）－毛细管电泳－荧光检测－DNA自动排序（计算机分析）

毛细管电泳(ABI 310)【取代传统的聚丙烯酰胺平板电泳，提高了自动化程度，其测序通量以及准确率也得到进一步提升】

测序仪器的发展技术

1986年美国全球第一台测序仪370（一次一个样）-3130（四个）-3130XL（十六个）-3730（四十八）-3730XL

3730XL（毛细管）-96个样

全自动灌胶、进样，定量。

电脑：资料收集，分析，操作